DAPS - Departamento de Administração e Planejamento em Saúde

Projetos de Pesquisa

TítuloDESENVOLVIMENTO E AVALIAÇÃO DOS PARÂMETROS SOROLÓGICOS DE TESTE RÁPIDO IMUNOCROMATOGRÁFICO PARA O DIAGNÓSTICO DA TUBERCULOSE ATIVA

DepartamentoDAPS - Departamento de Administração e Planejamento em Saúde

Descrição:1. Identificação da proposta Este trabalho se propõe a desenvolver e avaliar os parâmetros sorológicos de um método imunocromatográfico (IC) para detecção de anticorpos IgG anti-Mycobacterium tuberculosis em amostras sangüíneas, que permita o diagnóstico rápido da tuberculose humana. A tuberculose é uma doença infecto-contagiosa de grande incidência no mundo e ocorre em maior proporção em populações de baixas condições socioeconômicas, entretanto, com o advento da AIDS e o Alcolismo, um novo perfil epidemiológico da doença parece começar a ser desenhado (OPAS/OMS, 2008). Esta doença, continua sendo uma das doenças crônicas mais importantes da história da humanidade, sobretudo nas áreas mais carentes do mundo. Apresenta-se com grandes repercussões sociais, pois acomete, predominantemente, a população adulta e produtiva. Estima-se que 1/3 da população mundial está infectada e com risco de desenvolver tuberculose (OPAS/OMS, 2008). A tuberculose ainda é responsável pela morte de 170.000 crianças a cada ano e atualmente é a principal causa de morte por doenças infecciosas entre adulto, em todo mundo, superando as mortes por AIDS, malária e outras. No ano de 1993 a OMS, reconheceu a gravidade do problema e classificou a tuberculose como uma situação de “endemia global”. Historicamente vários eventos contribuíram para o atual panorama da tuberculose no mundo: a) a epidemia de HIV aumentou acentuadamente os casos de tuberculose, pois na fase inicial da doença AIDS a tuberculose não difere da forma usual de manifestação e de reação imunitária. Mas, na fase mais avançada, a diminuição dos linfócitos T CD4 compromete a ativação e o recrutamento de macrófagos (Silveira, 1999) resultando proliferação e disseminação de bacilos pela corrente sanguínea; b) a deterioração das condições socioeconômicas de parte da população mundial; c) a elevação da taxa de abandono do tratamento antituberculose; d) o aparecimento da multirresistência e e) a falta de interesse da comunidade científica e dos formadores de políticas públicas em relação à tuberculose (Fernandes et al, 1999). O Brasil é um dos quatro países com maior número absoluto de casos de tuberculose no mundo. O total de casos em 2006, segundo o Sistema Único de Saúde (SUS) é de 78.834 casos. Estima-se que cerca de 50 milhões de Brasileiros encontram-se infectados. Na região Sudeste, concentram-se 47% (38.992) dos casos notificados. Na cidade do Rio de Janeiro, encontramos a maior taxa nacional: 120/100.000. As incidências foram de 83,4/100.000 hab. para tuberculose, em todas as formas, e de 39,4/100.000 hab. para casos bacilíferos (OPAS/OMS, 2008). O diagnóstico da tuberculose deve ser estabelecido com base no reconhecimento dos sinais e sintomas clínicos sugestivos da doença e em dados epidemiológicos, por investigação laboratorial para demonstração do parasito nos tecidos pulmonares por meio de contagem microscópica do número de bacilos por lâmina (baciloscopia) e o crescimento do bacilo em meio de cultura (Mello, 2001). As estratégias de vigilância e controle da tuberculose vêm sendo, fundamentalmente, o diagnóstico precoce da doença e o tratamento e acompanhamento dos casos. Após a OMS declarar a tuberculose em “estado de emergência” no mundo, novas metas foram traçadas para o controle da doença. As metas internacionais estabelecidas pela OMS e pactuadas pelo governo brasileiro são de descobrir 70% dos casos de tuberculose estimados e curá-los em 85%(OPAS/OMS, 2008). O Programa Nacional de Controle da Tuberculose (PNCT) está integrado na rede de Serviços de Saúde. É desenvolvido por intermédio de um programa unificado, executado em conjunto pelas esferas federal, estadual e municipal. Está subordinado a uma política de programação das suas ações com padrões técnicos e assistenciais bem definidos, garantindo desde a distribuição gratuita de medicamentos e outros insumos necessários, até ações preventivas e de controle do agravo. Isto permite o acesso universal da população às suas ações. Dentro dos parâmetros de controle da tuberculose foi desenvolvido o DOTS (sigla em inglês para Estratégia do Tratamento Supervisionado da Tuberculose) que é uma proposta de intervenção que aumenta a probabilidade de cura dos doentes em função da garantia do tratamento assistido, contribuindo para a interrupção da transmissão da doença. É uma estratégia de controle da tuberculose recomendada internacionalmente. Curar pacientes, salvar vidas, reduzir a transmissão e prevenir o aparecimento e disseminação da tuberculose. Com o DOTS, o paciente recebe a medicação e tem todo o seu tratamento observado pelos serviços de saúde. Na primeira fase (2 meses HRZ) de tratamento faz-se, no Brasil, um mínimo de três observações semanais e na segunda fase (4 Meses HR), uma observação semanal. (OPAS/OMS, 2008) 2. Objetivos 2.1 Objetivos gerais • Desenvolver e avaliar os parâmetros sorológicos em um método imunocromatográfico (IC) para detecção de anticorpos IgG anti-Micobacterium tuberculosis no sangue, plasma ou soro, que permita o diagnóstico rápido da tuberculose humana. 2.2 Objetivos específicos • Melhorar a qualidade do diagnóstico da tuberculose, principalmente da tuberculose infantil, com o emprego do IC utilizando anticorpos extraídos de ovos de galinha (IgY), que permitem ligações mais estáveis e de elevada avidez. • Estimar os parâmetros sorológicos referentes à sensibilidade, especificidade, acurácia, reprodutibilidade e os valores de predição do IC para o diagnóstico da tuberculose, considerando formas clínicas e faixa etária. • Comparar os resultados do IC com os obtidos por outras metodologias de diagnóstico (baciloscopia e cultura). 3. Metodologia 3.1 Design do dispositivo de imunocromatografia proposto O dispositivo de imunocromatografia (DIC) é composto de uma membrana porosa de celulose modificada e membranas absorventes acessórias de fibra de vidro, contendo os elementos de reação, ajustadas em um invólucro plástico apropriado com uma janela para se acrescentar a amostra de teste e outra para leitura do resultado da reação. A utilização do DIC é facilitada pela apresentação do kit que contém além do próprio dispositivo, os acessórios necessários à execução do teste, como os dispositivos de coleta (lanceta) e o líquido eluidor/extrator em frasco conta gotas. Basta colher a amostra do indivíduo sob testagem, por punção em um dos dedos das mãos e a seguir dispensa-se diretamente, apenas uma gota de sangue colhida na janela de teste, imediatamente dispensa-se 5 gotas do líquido eluidor/extrator. Aguardam-se alguns minutos (5 – 10 minutos) para leitura dos resultados macroscopicamente evidentes. O princípio de funcionamento do DIC é simples, baseia-se na reação específica antígeno-anticorpo. Compõe-se de uma fase sólida (membrana porosa), onde estão imobilizados elementos de captura e uma fase móvel onde estão suspensos o conjugado de captura (micro-esfera de látex colorido-anticorpo) e a molécula alvo (amostra contendo a molécula alvo). A fase móvel migra sobre a fase sólida por efeito de capilaridade, conduzindo o complexo formado entre a molécula alvo e o conjugado de captura, que será retido na linha de captura da fase sólida, formando um complexo macromolecular colorido visível ao olho humano. Caso a amostra não contenha a molécula alvo esta linha de reação não se formará. Uma segunda linha de reação, denominada de linha de controle se forma pela captura do conjugado livre, que permite a confirmação da migração da fase móvel. O teste rápido proposto é um DIC para detecção de anticorpos anti- Mycobacterium tuberculosis em amostras sanguíneas, usando PPD como antígenos, e anticorpos policlonais anti-IgY como elementos de captura na fase sólida (linhas de captura), e um conjugado de IgY anti-imunoglobulina IgG anti- Mycobacterium tuberculosis da amostra sanguínea. A finalidade dos policlonais anti-IgY é o estabelecimento de uma linha de controle interno para revelar a migração da fase móvel por captura do conjugado de IgY.

Grupo de pesquisaVIGILÂNCIA DE BASE LABORATORIAL DE DOENÇAS INFECCIOSAS

Linha de pesquisaVIGILÂNCIA EPIDEMIOLÓGICA

programa de pós graduação

CoordenadorVALMIR LAURENTINO SILVA

Subárea de Conhecimento4.06.02.00-1

Ano do início2008    Ano previsto do fim2010

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